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ezbioscience B0003说明书

 更新时间:2022-11-21 点击量:685

EZ-press Cell to cDNA Kit PLUS

产品概述

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介绍

EZ-press 细胞转 cDNA 试剂盒 PLUS 提供了一种快速简便的方法,无需分离 RNA 即可从培养细胞中生产 cDNA。该试剂盒生成的cDNA适用于基因克隆和基因表达的定量分析,因此是TRIzol方法的良好替代品。

与TRIzol方法相比,该试剂盒具有以下几个显著优势:

1.易于使用。从培养的细胞开始,只需两个步骤(细胞裂解和逆转录)即可合成高质量的cDNA,无需RNA分离。

2.快速。整个实验(从细胞到cDNA)可以在不到25分钟的时间内完成。

3.稳定,可重复性强。在整个实验过程中,总RNA被wan美保留,从而获得稳定且高度可重复的结果。

4.灵敏度高。灵敏度高。每个样品的检测下限仅为100个细胞。

5. 没有基因组DNA残留。基因组DNA的去除比以前的版本更充分。此外,该试剂盒中使用的试剂安全无毒,与臭味和危险的TRIzol试剂相比,这是令人愉快的。

与EZ-press细胞转cDNA试剂盒相比,模板RNA可以通过乙醇沉淀从细胞裂解物中收集,溶解在ddH 2 O中。然后可以通过分光光度计检测RNA浓度,例如Nanodrop。因此,在随后的RT反应中,每个样品中可以等量的RNA用作模板。此外,EZ-press细胞到cDNA试剂盒PLUS具有更高的RT效率。该试剂盒进行的逆转录反应仅需15min即可完成。

实验程序一览

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细胞裂解液解冻细胞裂解

缓冲液,倒置或轻弹试管数次以彻di混合(不要使用涡旋),然后将试管放在冰上。

1A.对于细胞数小于3×105/样品的贴壁细胞:

a) 从孔中吸出培养基。

b)用PBS(200μl/孔)洗涤孔。在不干扰细胞的情况下尽可能wan全去除PBS。

c) 以 80 μl 细胞裂解缓冲液/1×105个细胞的比例向每个样品添加细胞裂解缓冲液,轻轻上下移液 10 次以裂解细胞。您应该将 160ul 细胞裂解缓冲液添加到 2×105个细胞中)。

d)立即将4μl细胞裂解物转移到新管中,加入0.8μlgDNA去除剂并轻轻混合。在25°C孵育5分钟。

1B.对于细胞数大于3×105/样品或悬浮细胞的贴壁细胞:

a)(仅适用于贴壁细胞,对于悬浮细胞,从步骤b开始)使用实验室常规采用的传代培养方法分离细胞。

b)计数然后轻轻沉淀细胞,丢弃生长培养基。

c) 通过将细胞重悬于每 1×105个细胞的 ~0.1 mL PBS 中来洗涤 PBS 中的细胞。

d)将一定量的细胞(~1×105)转移到每个样品的新1.5ml离心管中,以低速(~1000rpm,5min)离心细胞,然后小心地吸出PBS,而不会干扰细胞沉淀。

e) 向每个样品中加入 80 μl 细胞裂解缓冲液,轻轻上下移液 10 次以裂解细胞。

f)立即将4μl细胞裂解物转移到新管中,加入0.8μlgDNA去除剂并轻轻混合。在25°C孵育5分钟。

2.将裂解物放在冰上,在30分钟内进行RT反应。

注意:1.80μl细胞裂解缓冲液的容量约为1×105个细胞,根据细胞类型而变化。为了获得最佳结果,强烈建议进行试点实验以确定每次裂解的最佳细胞数。

2.在96、48、24和12孔细胞培养板中培养的细胞,细胞数不超过3×105,可在PBS洗涤后直接用于裂解。当处理超过3×105 /孔(或培养皿)的细胞时,请遵循程序1B:必须首先分离细胞(步骤a)。然后,将细胞培养基加入胰蛋白酶分离的细胞中,计数,低速离心并弃去上清液(步骤b),用适当体积的PBS重悬(步骤c),然后取~1×105个细胞/样品用80μl细胞裂解缓冲液裂解(步骤d)。

3.细胞裂解物与任何其他常用的RT试剂不相容(使用其他RT试剂无法产生或很少的cDNA)。因此,必须使用该试剂盒中提供的特殊优化的RT试剂对细胞裂解物进行逆转录。

产品详情

名称      EZ-press Cell to cDNA Kit PLUS

编号     B0003

品牌     ezbioscience