jembio 末端脱氧核苷酸转移酶 (TdT)说明书
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末端脱氧核苷酸转移酶 (TdT)
末端脱氧核苷酸转移酶 (TdT) 是一种不依赖模板的聚合酶，可催化将脱氧核糖核苷酸单磷酸从三磷酸添加到 DNA 的 3' 羟基末端。
描述：
• 底物是：单链DNA、具有3'-羟基末端的双链DNA 和寡脱氧核苷酸引物(1)。
• 用于使用核糖核苷酸 (2) 对 3'-末端进行特定标记。
• 用 [a-32P] 3'-脱氧核苷标记 DNA 片段的 3'-末端 (3)。
• 将脱氧核糖核苷酸的均聚物尾部添加到载体或 cDNA (4,5)。
单位定义：一个单位定义为在 37°C 下 1 小时内将 1 nmol dAMP 从 dATP 转移到寡脱氧核糖核苷酸起始剂 p(dA)50 的 3'-OH 末端所需的酶量。 储存条件：-20°C 储存。
储存缓冲液：100 mM Tris-HCl（pH 7.2，22°C）、1 mM 二硫苏糖醇和 50% (v/v) 甘油。
检测条件：40 mM 二甲胂酸钾 (pH 7.2)、8 mM MgCl2、8.3 mM 磷酸钾、0.33 mM ZnSO4、10 mg/ml 牛血清白蛋白、0.01 mM 寡脱氧核苷酸 p(dA)50 和 1 mM [a-³²P]在 60 µl 的反应体积中，在 37oC 下反应 1 小时。
质量控制：所有制剂都经过核酸内切酶、核酸外切酶和非特异性 RNase 以及单链和双链 DNase 活性的检测。
参考：1. Chang, LM 和 Bollum, FJ (1971) J. Biol。化学 246、909-916。2. Roychoudhury, R. 和 Kossel, H. (1971) Eur。J. 生物化学。22、310-320。3. Tu, CPD, 和 Cohen, SN (1980) Gene 10, 177-1834. Roychoudhury, R.、Jay, E. 和 Wu, R. (1976) Nucleic Acids Res。3, 863-877。5. Deng, G. 和 Wu, R. (1983) Methods Enzymol。100, 96-116。
