polyplus-transfection FectoPRO说明书
| 试剂 | FectoPRO ® |
|---|---|
| 分子交付 | 脱氧核糖核酸 |
| 应用 | 生物生产 |
| 细胞类型 | 悬浮液 CHO、HEK-293 和衍生物 |
| 转染次数 | 1 mL FectoPRO ®足以将 800 mL 的细胞培养物转染超过 1 L |
| 贮存 | 5°C ± 3°C，如果储存得当，自生产之日起可稳定 3 年 |
| 提供 | FectoPRO ®助推器 |
使用瞬时转染和基因表达实现蛋白质产量。
FectoPRO转染试剂专为使用低 DNA 量（< 1 µg/ml 细胞培养物）在各种无血清培养基中的悬浮 CHO 和 HEK-293 细胞中增强瞬时基因表达 (TGE)而设计。
FectoPRO® 介导的转染过程可以轻松地从几毫升细胞培养物扩展到几升细胞培养物，确保强大的可重复蛋白质生产。更高的生产力和低 DNA 量要求使 FectoPRO® 成为生物生产过程的经济高效的解决方案。
| 参考编号 | 产品 | 转染试剂 | 表达助推器 | 表达培养基 |
|---|---|---|---|---|
| 116-001 | FectoPRO® 试剂 | 1 毫升 | 1 毫升 | —— |
| 116-010 | FectoPRO® 试剂 | 10 毫升 | 10 毫升 | —— |
| 116-100 | FectoPRO® 试剂 | 100 毫升 | 100 毫升 | —— |
| 716-06L | FectoCHO® CD 培养基 | —— | —— | 6 x 1 升 |
| 716-01LKIT | FectoCHO® 表达系统 | 1 毫升 | 1 毫升 | 1升 |
FectoPRO ®在无血清培养基中悬浮生长的 CHO 和 HEK-293 细胞中实现了惊人的高蛋白质和抗体产量（图 1）。
图 1. FectoPRO ®在悬浮 CHO 细胞中产生惊人的抗体产量。将细胞以 1 x 10 6细胞/ml接种到30 ml FreeStyle™ CHO 表达培养基中，并按照各自推荐的方案用 FectoPRO ® (0.8 µg DNA/ml) 或 FreeStyle™ MAX 试剂 (1.25 µg DNA/ml)转染试剂。使用蛋白 G 生物传感器（fortéBIO ®octet RED96 系统）在转染后 1 至 6 天测定重组小鼠 IgG 的产量。FreeStyle™ 是 Life Technologies™ Corporation 的商标。数据由 ProteoGenix SAS（法国）友情提供。
探索我们专用于 cho 细胞的试剂盒：FectoCHO ®表达系统
在转染效率方面，FectoPRO ®在很大程度上优于其他转染试剂，例如生物生产过程中常用的线性 PEI（图 2），从而导致更高的蛋白质产量（图 3）。
图 2. FectoPRO ®在悬浮 CHO 细胞中提供高转染效率。将 FreeStyle™ CHO-S 细胞以 1 x 10 6 个细胞/ml接种到30 ml FreeStyle™ CHO 表达培养基中，并使用 FectoPRO ® + FectoPRO ® Booster 或 FreeStyle™ MAX Reagent 使用 0.4 µg/ml 和 1.25 µg/ml分别是 GFP 表达质粒。使用荧光显微镜在转染后 24 小时测定 GFP 表达。
图 3. FectoPRO ®在悬浮 CHO 和 HEK-293 细胞中提供了蛋白质产量。FreeStyle™ CHO-S 和 HEK-293F 细胞以 1 x 10 6细胞/ml接种在 30 ml FreeStyle™ CHO 或 293 表达培养基中，并用 FectoPRO ® + FectoPRO ® Booster (0.4 µg DNA/ml)、FreeStyle™转染MAX Reagent (1.25 µg DNA/ml) 或 PEIpro ® (1 µg DNA/ml) 遵循各自试剂的推荐方案。在转染后 72 小时（CHO 细胞）和 120 小时（HEK-293 细胞），通过蛋白 G 亲和定量 (HPLC) 和蛋白质印迹分析 IgG3-Fc (34 kDa) 的产生。标准品对应于纯化的 IgG3-Fc (34 kDa)。
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高质量的质粒 DNA 制备可能非常昂贵，尤其是当大规模蛋白质生产需要大量 DNA 和许多质粒时。FectoPRO ®使用 0.4 至 0.6 µg DNA / 10 6细胞 / ml 细胞培养物可节省 40 至 60% 的 DNA 成本；因此使该套件成为生物生产过程的经济实惠的解决方案。
表 1.根据制造商的建议，用于转染的 DNA 量和试剂量（FectoPRO ®和竞争对手）。
蛋白质生产过程的持续时间在过去几年有所增加，现在大多数蛋白质生产过程持续 1-2 周以获得最佳蛋白质生产量。FectoPRO ® 的开发旨在确保持续数天的蛋白质生产，同时保持高细胞活力以实现更持久的蛋白质生产（图 4）。
图 4. FectoPRO ®在悬浮细胞中提供持续的蛋白质生产。FreeStyle™ HEK-293F 细胞以 1 x 10 6细胞/ml接种在 30 ml FreeStyle™ 293 表达培养基中，并按照标准方案用 FectoPRO ® + FectoPRO ® Booster (0.5 µg DNA/ml)转染。在不同时间点后通过蛋白 G 亲和力定量 (HPLC) 测定 IgG3-Fc 的产生。使用 FreeStyle™ CHO-S 获得了类似的结果（数据未显示）。
使用可轻松适应各种培养容器的强大方案简化您的生物生产过程。FectoPRO ®介导的转染可以从 30 毫升线性扩展到升细胞培养物，无需修改方案（图 5）。
图 5. FectoPRO ®在 CHO 细胞中易于扩展和重现。FreeStyle™ CHO-S 细胞以 1 x 10 6 个细胞/ml接种在 30 ml、100 ml、300 ml 或 1 L FreeStyle™ CHO 表达培养基中，并用 FectoPRO ® + FectoPRO ® Booster (0.5 µg DNA/ml)转染. 在第 1 天至第 6 天，使用台盼蓝排除测定法测定细胞活力，并通过蛋白 G 亲和力定量 (HPLC) 和蛋白质印迹法测定 IgG3-Fc 的产生。标准品对应于纯化的 IgG3-Fc (34 kDa)。
FectoPRO ®是使用高度受控的生产过程制造和配制的。这确保了从实验到实验的高度可重复的结果。此外，为了满足当前的监管指南，FectoPRO ®发布时采用了先进的质量控制，包括蛋白质生产力规范，以保证批次间的出色一致性（图 6）。
图 6. FectoPRO ®具有出色的批次间重现性。悬浮CHO细胞以1 x 10 6细胞/ml接种在30ml CHO培养基中，并按照标准方案使用3个不同批次的FectoPRO ® (CCIII 078、CCIII 104或CCIII 106)进行转染。转染后 72 小时，通过蛋白 G 亲和力定量分析 IgG3-Fc 的产生。在悬浮的 HEK-293 细胞上获得了类似的结果（数据未显示）。
与其他市售试剂不同，FectoPRO ®转染试剂盒适用于 CHO 和 HEK-293 细胞（图 2 和 3）。该试剂兼容多种培养基配方；因此，实验室实施简单明了（图 7，表 2）。
图 7. FectoPRO ®在不同培养基中生长的悬浮 CHO 细胞中提供了蛋白质产量。将 CHO 细胞以 1 x 10 6细胞/ml接种到30 ml FreeStyle™ CHO 表达培养基、CD CHO 培养基或 Pro-CHO™ 4 培养基中，并按照推荐的方案用 FectoPRO ® + FectoPRO ® Booster 或 FreeStyle™ MAX 试剂转染各自的试剂。在转染后 72 小时通过蛋白 G 亲和定量 (HPLC) 测定 IgG3-Fc 的产生。
表 2.在不同培养基中使用 FectoPRO ®培养 CHO 细胞的蛋白质产量。
表 3. HEK-293 细胞在不同培养基中使用 FectoPRO ® 的蛋白质产量。
探索我们专用于 CHO 细胞的试剂盒：FectoCHO ®表达系统
FreeStyle TM、CD FortiCHO TM、CD OptiCHO TM、Expi293 TM、ExpiCHO TM和CD293 是Gibco ® 的商标。
Pro-CHO TM、PowerCHO TM和 Pro293 TM是 Lonza TM Group 的商标。
HyClone TM、HyCell TM和TransFx TM是GE Healthcare TM 的商标。
BalanCD ®和Transfectory TM是Irvine Scientific公司的商标TM。
蛋白质生产包括在细胞系中以小/中到大规模过表达重组蛋白质或肽。产生的生物分子可用于研究目的，如结构表征，一直到治疗或医学应用。
FectoPRO ®符合生物制造指南。事实上，FectoPRO ®保证不含动物源成分，并且是化学成分确定的。对生产的每个批次进行系统的批次管理和放行测试。此外，FectoPRO ®转染试剂盒经过先进的质量控制：蛋白质生产力、细胞活力和*无菌。
此外，Polyplus-transfection ®自 2002 年起获得 ISO 9001 质量管理体系认证；这一级别的认证向全球客户保证，供应商已为产品开发、制造、销售和客户支持建立了可靠且有效的流程。
