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利用Transcreener CD73检测发现新型抑制剂

 更新时间:2020-12-29 点击量:1325

 

 

bellbrooklabs利用Transcreener CD73检测发现新型抑制剂

Transcreener CD73检测可测量由ecto-5'-核苷酸酶(也称为5'-核苷酸酶,NT5E,分化簇73或CD73)产生的腺苷(ADO)。通过测量ADO的产量,研究人员可以有效地确定该酶的活性。该测定法为筛选CD73调节剂的整个化合物文库提供了强大的工具,以帮助寻找疾病的新疗法,例如癌症。

该测定法使用偶联酶,该偶联酶使用CD73产生的ADO产生产物AMP和ADP。然后可以使用受信任的TranscreenerADP²分析组件来测量ADP。该试剂盒配有测量活性所需的所有检测试剂。抑制剂筛选测定试剂盒中不包括CD73酶。

CD73是嘌呤能信号传导的重要信使

外源核苷酸是与细胞膜结合的酶,具有外部定向的活性位点,可将核苷酸代谢为核苷,对于维持免疫稳态至关重要。CD39将ATP和ADP水解为AMP。CD73将AMP进一步加工成腺苷,从而对许多疾病产生重大影响。近的研究表明,腺苷在肿瘤微环境中的免疫抑制中起着关键作用,而外切核苷酸酶正成为有希望的免疫肿瘤学靶标。了解更多有关使用TranscreenerAMP²测定法靶向CD39的信息。

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检测腺苷以测量CD73的酶活性

 
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查看预先录制的网络研讨会-Transcreener CD73分析:利用核苷酸检测来测量腺苷

这次演讲的重点 是在基础研究和药物发现中使用Transcreener®ADP 2分析法测量腺苷。涵盖的主题包括:

  • 开发用于测量CD73酶活性的偶联测定
  • 建立高通量筛选条件
  • 设置屏幕
  • 运行剂量响应曲线,重点是数据分析
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应用领域

  • 测量CD73的酶活性
  • 筛选CD73抑制剂的复合文库
  • 量化抑制剂效能(IC 50)
  • 抑制剂选择性分析

特征

  • 未标记腺苷的检测
  • 易于使用,同质,一步式
  • 初始速度条件下的稳健分析Z'> 0.7
  • 远红外荧光读数程度地减少了化合物干扰
  • 一种安全的非放射性方法

易于使用,混合阅读,HTS就绪分析

Transcreener CD73测定法采用易于HTS使用的混合读取格式。运行您的酶反应,添加Transcreener试剂,然后阅读板。该测定与96、384和1536孔格式兼容。

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初始速度下腺苷的检测

当原始数据转换为使用标准曲线生成的腺苷时,该测定法证明了线性。

人CD73酶滴定

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线性响应

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抑制剂筛选和执行SAR

Transcreener Assays设计用于以高通量格式筛选化合物库。还可以使用该测定法进行随访SAR,从而轻松确定抑制剂的效价。

1600复合先导筛

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使用CD73活性测定法筛选了来自Chembridge多样性库的子集。该子集的ah率为0.85%,而稳健的Z'为0.81。

获取准确的剂量响应测量

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在存在5 pM CD73的情况下PSB 12379的剂量反应曲线。该数据说明IC 50为19 nM。

可靠的分析可产生质量数据

使用优化的CD73反应条件进行的Z'测量表明存在可靠的分析方法。如此强大的数据对于大尺寸的高通量筛选至关重要,由于大量样品难以完成。

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在主要的多模阅读器上验证了远红FP读数

供应商仪器
新奥门原料免费资料TriStar²SLB 942
密特拉拉斯LB 943
 
新奥门原料免费资料Cytation™5
Cytation™3
Cytation™1
Synergy™H1
Synergy™2 / H4 / 4
Synergy™HTX
Synergy™Neo 2
 
新奥门原料免费资料POLARstar ®欧米茄
FLUOSTAR ®欧米茄
PHERAstar ® FSX
PHERAstar ®加/ FS
CLARIOstar ® /加
 
新奥门原料免费资料分析师® GT / HT
双子座® XPS / EM
的SpectraMax ® M2 / M2e的
的SpectraMax ® M5 /的M5e / FlexStation ® 3
的SpectraMax ®范式
 
新奥门原料免费资料的EnVision ® /的EnVision ® XCITE
 
新奥门原料免费资料无限® M1000 / M1000Pro / Safire2™
无限® M200
无限® F500
无限® F200 /超进化
Spark™10M

包含什么

 
零件笔记
ADP²抗体核苷酸ADP特异的抗体。
ADP追踪器替换后,可以以FP分析格式读取荧光的变化。
腺苷用于启动CD73酶促反应并生成AMP / ADO标准曲线。
安培AMP用于创建ADO / AMP标准曲线,并用作CD73的底物。
三磷酸腺苷用作偶联酶的底物。
耦合酶将ADO传输到ADP和AMP,从而允许通过TranscreenerADP²分析组件测量ADP。

您将需要什么

 
零件笔记
CD73酶我们已经成功使用了R&D Systems Cat。公司的纯化重组CD73酶。#5795-EN。
酶缓冲液我们已经成功使用了pH 7.5的50 mM Tris,5 mM MgCl 2,1%DMSO和0.01%Brij-35缓冲液。
停止解决方案该测定设计为以动力学模式运行。该套件没有停止解决方案。
检测板可以直接通过BellBrook实验室购买测定板。

 

FP-需要一个具有非粘合表面的全黑色印版。我们建议使用康宁384孔板Cat。#4514

 

Transcreener CD73检测试剂盒

*对于定制或批量订单(超过10,000口井),

 
货号。产品描述价钱
3026-1 KTranscreener CD73 FP测定法(1,000测定法,384孔)$ 995
3026-10KTranscreener CD73 FP测定法(10,000测定法,384孔)$ 5,699

FP检测板

 
货号。产品描述价钱
2229康宁384孔黑色检测板(#4514),3包(1,000多种检测)$ 45
2230康宁384孔黑色检测板(#4514),30包(10,000+检测)$ 400
 

CD73检测服务

有兴趣推进您的程序,但不想内部进行分析吗?我们的科学家可以提供帮助!BellBrook的科学家将利用其丰富的生物化学和酶学专业知识与您合作,并加快您的CD73程序。

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潜在客户发现服务包括:

  • 抑制剂筛选–识别或确认靶标的活性。
  • 抑制剂效能分析–靶标和/或相关蛋白的剂量反应。快速IC 50结果。
  • 停留时间测量–使用“跳跃稀释”酶法测定k off。
  • 作用机理研究–动力学分析定义了抑制方式。