Transcreener CD73检测可测量由ecto-5'-核苷酸酶(也称为5'-核苷酸酶,NT5E,分化簇73或CD73)产生的腺苷(ADO)。通过测量ADO的产量,研究人员可以有效地确定该酶的活性。该测定法为筛选CD73调节剂的整个化合物文库提供了强大的工具,以帮助寻找疾病的新疗法,例如癌症。
该测定法使用偶联酶,该偶联酶使用CD73产生的ADO产生产物AMP和ADP。然后可以使用受信任的TranscreenerADP²分析组件来测量ADP。该试剂盒配有测量活性所需的所有检测试剂。抑制剂筛选测定试剂盒中不包括CD73酶。
外源核苷酸是与细胞膜结合的酶,具有外部定向的活性位点,可将核苷酸代谢为核苷,对于维持免疫稳态至关重要。CD39将ATP和ADP水解为AMP。CD73将AMP进一步加工成腺苷,从而对许多疾病产生重大影响。近的研究表明,腺苷在肿瘤微环境中的免疫抑制中起着关键作用,而外切核苷酸酶正成为有希望的免疫肿瘤学靶标。了解更多有关使用TranscreenerAMP²测定法靶向CD39的信息。
这次演讲的重点 是在基础研究和药物发现中使用Transcreener®ADP 2分析法测量腺苷。涵盖的主题包括:
Transcreener CD73测定法采用易于HTS使用的混合读取格式。运行您的酶反应,添加Transcreener试剂,然后阅读板。该测定与96、384和1536孔格式兼容。
当原始数据转换为使用标准曲线生成的腺苷时,该测定法证明了线性。
Transcreener Assays设计用于以高通量格式筛选化合物库。还可以使用该测定法进行随访SAR,从而轻松确定抑制剂的效价。
使用CD73活性测定法筛选了来自Chembridge多样性库的子集。该子集的ah率为0.85%,而稳健的Z'为0.81。
在存在5 pM CD73的情况下PSB 12379的剂量反应曲线。该数据说明IC 50为19 nM。
使用优化的CD73反应条件进行的Z'测量表明存在可靠的分析方法。如此强大的数据对于大尺寸的高通量筛选至关重要,由于大量样品难以完成。
供应商 | 仪器 | ||
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![]() | TriStar²SLB 942 | ||
密特拉拉斯LB 943 | |||
![]() | Cytation™5 | ||
Cytation™3 | |||
Cytation™1 | |||
Synergy™H1 | |||
Synergy™2 / H4 / 4 | |||
Synergy™HTX | |||
Synergy™Neo 2 | |||
![]() | POLARstar ®欧米茄 | ||
FLUOSTAR ®欧米茄 | |||
PHERAstar ® FSX | |||
PHERAstar ®加/ FS | |||
CLARIOstar ® /加 | |||
![]() | 分析师® GT / HT | ||
双子座® XPS / EM | |||
的SpectraMax ® M2 / M2e的 | |||
的SpectraMax ® M5 /的M5e / FlexStation ® 3 | |||
的SpectraMax ®范式 | |||
![]() | 的EnVision ® /的EnVision ® XCITE | ||
![]() | 无限® M1000 / M1000Pro / Safire2™ | ||
无限® M200 | |||
无限® F500 | |||
无限® F200 /超进化 | |||
Spark™10M |
零件 | 笔记 |
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ADP²抗体 | 核苷酸ADP特异的抗体。 |
ADP追踪器 | 替换后,可以以FP分析格式读取荧光的变化。 |
腺苷 | 用于启动CD73酶促反应并生成AMP / ADO标准曲线。 |
安培 | AMP用于创建ADO / AMP标准曲线,并用作CD73的底物。 |
三磷酸腺苷 | 用作偶联酶的底物。 |
耦合酶 | 将ADO传输到ADP和AMP,从而允许通过TranscreenerADP²分析组件测量ADP。 |
零件 | 笔记 |
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CD73酶 | 我们已经成功使用了R&D Systems Cat。公司的纯化重组CD73酶。#5795-EN。 |
酶缓冲液 | 我们已经成功使用了pH 7.5的50 mM Tris,5 mM MgCl 2,1%DMSO和0.01%Brij-35缓冲液。 |
停止解决方案 | 该测定设计为以动力学模式运行。该套件没有停止解决方案。 |
检测板 | 可以直接通过BellBrook实验室购买测定板。
FP-需要一个具有非粘合表面的全黑色印版。我们建议使用康宁384孔板Cat。#4514 |
*对于定制或批量订单(超过10,000口井),
货号。 | 产品描述 | 价钱 |
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3026-1 K | Transcreener CD73 FP测定法(1,000测定法,384孔) | $ 995 |
3026-10K | Transcreener CD73 FP测定法(10,000测定法,384孔) | $ 5,699 |
货号。 | 产品描述 | 价钱 |
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2229 | 康宁384孔黑色检测板(#4514),3包(1,000多种检测) | $ 45 |
2230 | 康宁384孔黑色检测板(#4514),30包(10,000+检测) | $ 400 |
有兴趣推进您的程序,但不想内部进行分析吗?我们的科学家可以提供帮助!BellBrook的科学家将利用其丰富的生物化学和酶学专业知识与您合作,并加快您的CD73程序。