IL28B RealFast™检测 | ![]() | 7-200 7-203 |
一。预期用途
IL28B RealFast™检测是一种快速、准确的实时PCR检测方法,用于检测
人干扰素lambda 4(ifnl4)基因/假基因,位于白细胞介素28b(il28b)基因上游。遗传
有助于预测丙型肝炎病毒(HCV)感染患者的治疗反应,这些患者正在考虑接受聚乙二醇干扰素/利巴韦林(PEGIFN/RBV)治疗。有利tt等位基因的纯合携带者倾向于高达3倍
持续病毒学应答(SVR)比∏G等位基因携带者。在人类DNA提取液中,定性分析鉴别出
可能与高(TT/TT)或低(TT/△G和△G/△G)治疗相关的IFNL4 TT>ΔG基因型——诱导或自发清除HCV。
参考序列:HGVS:NG U 042193.1:G.1457 U 1458;Delaainsc;NCBI DBSNP:RS368234815。
2.介绍
慢性丙型肝炎病毒感染影响了大约3%的世界人口,是肝硬化、肝癌和肝移植的主要原因。
推荐的pegifn/rbv标准疗法的成功与否取决于病毒和宿主因素。患者感染不利
1型或4型hcv的svr低于2型或3型hcv感染者。影响治疗反应的宿主因素包括年龄、性别
影响抗病毒活性的种族和遗传多态性。ifnl4 rs368234815 t t>.-g变体与rs12979860 c>t紧密相关,
长期治疗成功的标志。几项研究表明rs368234815是il28b的功能变异
mrna调节,与rs12979860相比,作为svr和hcv清除的更好预测因子,尤其是在非洲患者中
祖先。IFNL4基因型TT/TT有利于HCV患者自发和治疗诱导的病毒清除,主要是在那些
感染1型或4型。
三。套件内含物100/32 RXN
realfast™2x基因分型混合物1瓶白色瓶盖1000/320微升
IL28B分析混合物1瓶紫色瓶盖550/550微升
IL28B TT/TT对照品1瓶绿盖75/75微升
IL28B∏g/∏g-对照品1瓶红盖75/75微升
该试剂盒包含终体积为20微升的100/32反应试剂
每一个。
realfast™2x基因分型混合物包括hotstart taq
优化缓冲体系中的dna聚合酶和dntps。IL28B分析混合物由IFNL4基因特异性引物和两个等位基因特异性双标记水解探针组成。
试剂盒中提供了代表il28b tt/tt和∏g/∏g基因型的对照品。
四。储存和稳定性
IL28B RealFast™分析用冷却块装运。到达后,将试剂盒保存在-20°C。或者,将试剂盒保存在2到8°C,以便在
一个月。该试剂盒可承受20次冷冻/解冻循环,且无活性损失。避免长时间暴露在强光下。如果存储正确,
试剂盒将保持完整的活性,直到标签上标明的有效期为止。5个。产品描述
5.1。试验原理
该试验基于荧光5'核酸酶分析,也称为Taqman®分析。每个反应都包含一对基因特异性引物
它放大了ifnl4基因的110bp片段,以及两个双标记的等位基因特异性水解探针
扩增片段的序列。5’荧光探针和3’-猝灭染料在完整探针上的接近阻止了记者
从荧光中。在聚合酶链反应的延伸阶段,taq dna聚合酶的5'-3'外切酶活性能裂解5'-荧光
杂交探测器的记者。荧光团与猝灭染料的物理分离实时产生荧光信号,荧光信号与累积的pcr产物成正比。
在纯合tt/tt样本中,hex标记的tt探针与基因片段的互补链杂交。强壮的
在hex通道(556nm)中检测到荧光信号,在fam通道(520nm)中没有或仅检测到基线信号。反之亦然,在
纯合子∏g/∏g样本fam标记的∏g探针与基因片段结合。fam中检测到强荧光信号
在十六进制通道中没有或只有一个基线信号。在杂合子样本中(TT/△G),两个探针都与扩增子结合,并且
在两个通道中生成中间信号。
5.2。实时PCR仪器兼容性
IL28B RealFast™分析经验证可与AB 7500快速仪器一起使用。
该试剂盒与能够记录FAM和HEX荧光的各种通用实时PCR仪器兼容:
使用AB StepOne™时,将被动参考染料设置为“Rox”!提供的套件不含ROX。用于需要高rox的实时pcr仪器,用于数据的标准化(例如
Biosystems®仪器:StepOne™,7300,7900/7900ht),在2X基因分型混合物中添加终浓度为1μm的RoX。
5.3条。分析性能规范
il28b realfast™分析和检测高度连锁rs12979860 c>t多态性的参考试剂盒显示99,4%
84份样品基因分型结果的一致性。
在168个等位基因中,IL28B realfast™分析鉴定出113个有利TT和55个不利∏G等位基因,而参考试剂盒鉴定出
114个有利c等位基因和54个不利t等位基因。对一个不一致的样本进行测序后发现,存在∏g等位基因,但不存在
与一条染色体上的rs12979860 t等位基因相关。
IL28B RealFast™检测的敏感性和特异性分别显示真阳性和真阴性。
检测限:0.2ng基因组dna(每次反应)。建议DNA浓度:2至20 ng/μL基因组DNA。6.需要但未提供的材料
带FAM(520 nm)和HEX(556 nm)过滤器的实时PCR仪器,仪器兼容的反应容器,一次性无粉末
手套、涡流器、2.0毫升试管的微型离心机、试管架、一套校准的微量移液管(0.5–1000微升)、带气溶胶屏障的无菌针头
过滤器,分子级水,DNA提取系统,冷冻柜,生物危害废物容器。