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SGI-DNA CE1000-50K 说明书

 更新时间:2017-11-14 点击量:1332

世界*实验材料供应商 SGI-DNA正式授权上海起发为其中国代理, SGI-DNA在一直是行业的*,一直为广大科研客户提供zui为的产品和服务,上海起发一直秉承为中国科研客户带来的产品,的服务,签约 SGI-DNA就是为了给广大科研客户带来更加完善的产品和服务,您的满意将是我们zui大的收获

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SGI-DNA是Synthetic Genomics,Inc(SGI)的全资子公司,成立于2013年,总部位于加利福尼亚州La Jolla。

SGI-DNA基于克雷格·文特尔(J.Craig Venter),汉密尔·史密斯(Ham Smith),克莱德·哈奇森(Clyde Hutchison),丹·吉布森(Dan Gibson)及其团队 等科学家的科学进步和突破,利用*的专有DNA技术生产复杂的合成基因和试剂。SGI-DNA还提供全面的基因组服务,包括全基因组测序,文库设计和其他生物信息服务。

SGI-DNA负责SGI合成DNA业务的所有商业方面,并专注于与学术和商业研究人员的战略业务关系。

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XactEdit™ Cas9 Nuclease with NLS

含有NLS的XactEdit™Cas9核酸酶

使用这种高度纯化的酶,进行有针对性的指导RNA指导的双链DNA切割。带有NLS的XactEdit™Cas9核酸酶是一种含有核定位信号(NLS)的纯化的重组化脓性链球菌(Streptococcus pyogenes) Cas9蛋白。当与适当设计的引导RNA(gRNA)复合时,XactEdit™Cas9核酸酶介导位点特异性的靶向双链DNA切割。将Cas9:gRNA复合物(RNP)引入细胞产生双链DNA断裂(DSB),其已经用于多种靶向基因组编辑研究,例如同源敲入和基因敲除。

XactEdit™Cas9核酸酶可作为试剂盒或作为独立的酶使用,浓度为1 mg / mL或10 mg / mL,可配制的导向RNA(gRNA)靶向DNA消化。纯化至> 90%均一性,XactEdit™Cas9不显示非特异性核酸酶活性。这些性能,以及低内毒素水平,使XactEdit™Cas9成为各种应用的理想选择。XactEdit™酶可用于体外切割分析,或通过电穿孔或转染引入细胞以靶向基因组序列。与载体或基于mRNA的Cas9系统不同,XactEdit™Cas9 RNP复合物不需要转录或翻译,可以在进入细胞后立即行动。

概要

  •  高度纯化 - 通过反相HPLC和SDS-PAGE纯度大于90%
  • 高活性的质量控制 - 通过体外活性测定进行批量测试
  •  没有非特异性DNA酶或RNA酶活性
  •  低内毒素水平 - 通过LAL测定小于0.01 EU /μg
  •  含有核定位信号(NLS)以有效地靶向细胞核
  •  可用于1 mg / mL和10 mg / mL浓度

 

具有NLS的XactEdit™Cas9核酸酶显示出高水平的体外活性

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图2. 使用不同量的XactEdit™Cas9核酸酶(NLS)和gRNA的体外活性。为了确定使用的XactEdit?Cas9核酸酶和gRNA的zui有效量,进行体外活性测定。在每条泳道中,将100ng对应于同源框转录因子Emx1的770bp DNA片段与量的XactEdit TM Cas9蛋白和gRNA一起温育。XactEdit™Cas9:gRNA复合物的特异性切割产生两个片段(283 bp和487 bp)。数据表明,XactEdit?Cas9蛋白使用不同量的输入酶和gRNA有效地和特异性地切割靶位点处的底物。泳道1中显示的分子量(MW)标记是1kb梯。

具有NLS的XactEdit™Cas9核酸酶显示出高度一致的体内核酸酶活性

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图3. 具有NLS的XactEdit™Cas9核酸酶与其他市售Cas9(NLS)核酸酶相比的体内活性。体内将两种不同批次的XactEdit TM Cas9核酸酶的核酸酶活性与来自供应商T和N的Cas9核酸酶的核酸酶活性进行比较。对于每个测定,使用1μgCas9和200ng体外转录的指导RNA形成Cas9:gRNA复合物, Emx1基因。通过电穿孔将复合物引入HEK 293T细胞。通过突变检测分析(图A,左)和MiSeq TM分析(图B,右)检查Cas9双链断裂(DSB)频率。在图A中,由DSB产生的序列在琼脂糖凝胶电泳中显示为裂解产物,表明Cas9诱导的DSB位点。泳道1和8是分子量(MW)标记(来自New England Biolabs的Quick-Load 2-Log DNA ladder)。在图B中,靶位点的MiSeq TM测序的定量分析显示为转染细胞裂解的百分比。

高度纯化,以确保可靠,一致,具体的核酸酶活性

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图4. XactEdit™Cas9的反相HPLC分析。使用反相HPLC分析10μgXactEdit TM Cas9。Zorbax 300SB-C3柱,流动相A =在水中的0.1%TFA,流动相B =在乙腈中的0.1%TFA,在1.0mL / min,40℃,214nm检测下梯度= 5-100%B 30分钟。

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图5.还原XactEdit™Cas9的SDS-PAGE。使用还原性SDS-PAGE分析XactEdit Cas9。4-15%Bio-Rad TGX凝胶,Bio-Rad Precision Plus蛋白标记,SYPRO-Orange染色。

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图6. XactEdit™Cas9的批次到批次活动比较 使用针对5.5kb目标设计的三种不同指导RNA(gRNA-1,gRNA-2和gRNA-2)比较两种不同批次的XactEdit™Cas9的活性的体外活性测定。gRNA-SC是不识别目标DNA的混杂的阴性对照RNA。XactEdit™Cas9酶的存在或不存在分别由+和 - 表示。通过琼脂糖凝胶电泳分析样品以分离模板DNA(5.5kb,未切割)和消化产物(可变尺寸)。

 

ProductsCatalog #Pack Size
XactEdit™ Cas9 Nuclease (NLS) kit
Includes 10X XactEdit™ Digestion Buffer, Template for scrambled gRNA, Nuclease-free water
CE1000-50K50 µg
XactEdit™ Cas9 Nuclease (NLS) 1 mg/mLCE1000-5050 µg
XactEdit™ Cas9 Nuclease (NLS) 1 mg/mLCE1000-2505 x 50 µg
XactEdit™ Cas9 Nuclease (NLS) 10 mg/mLCE1001-250250 µg
XactEdit™ Cas9 Nuclease (NLS) 10 mg/mLCE1001-10001000 µg

 

我们公司zui大优势是强大的采购,

1:基本什么都能进口,血清,抗体,耗材,还有部分限制进口的,

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